OSNA

O OSNA (One Step Nucleic acid Amplification) é um ensaio de diagnóstico molecular automatizado que utiliza a tecnologia RT-LAMP* como método de amplificação de ácidos nucleicos para detetar a nível do ARNm o grau de expressão do gene que codifica para a citoqueratina 19 (CK19). A CK19 é um marcador de células epiteliais que em condições normais não é expressa no tecido linfático. A presença de ARNm de CK19 é correspondente ao tamanho dos focos metastáticos presentes no gânglio sentinela. A avaliação do resultado da doente baseia-se numa curva padrão realizada anteriormente onde são utilizados três calibradores com diferentes concentrações conhecidas de ARNm de CK19.
* RT-LAMP = Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification; sob licença da Eiken Chemical CO., Ltd

O tecido do gânglio linfático é simplesmente homogeneizado, não sendo necessária uma purificação prévia do ARN. As amostras são introduzidas no sistema automatizado de deteção em tempo real RD-100i que garante resultados rápidos, precisos e padronizados. Podem ser analisados até 4 gânglios linfáticos e os resultados estão disponíveis em cerca de 30 minutos.
A medição do marcador CK19 não só permite a diferenciação entre um resultado positivo e um negativo, mas também fornece uma indicação do grau da metástase. A reação de amplificação é produzida aos 16 minutos e é monitorizada em tempo real. Os resultados são visualizados em três categorias diferentes (++), (+) e (–) apresentando uma relação direta com o número de cópias de ARNm CK19.

O método OSNA está em conformidade com a Diretiva 98/79/CE para o diagnóstico in vitro e, por conseguinte, está aprovado para o uso diagnóstico em toda Europa, possuindo também a marca CE.